Expresión de los factores de transcripción sensibles a la hipoxia, de la respuesta inflamatoria y del estrés oxidativo a nivel muscular en tres modelos clínicos de hipoxemia / Expression of transcription factors sensitive to hypoxia, of the inflammatory response and oxidative stress to muscle level in three clinical models of hypoxemia

OBJETIVO: Comparar la expresión de marcadores de respuesta a hipoxia, inflamatorios y de estrés oxidativo en biopsia muscular de grupos de pacientes con hipoxia crónica continua, crónica intermitente y ambas combinadas. Evaluar el estado de la musculatura periférica y compararla entre grupos. METODOLOGÍA: Incluimos varones mayores de 18 años, diagnosticados de EPOC, Apnea Obstructiva del Sueño (AOS) o AOS-EPOC, a los que se realizó biopsia muscular del cuádriceps. Los biomarcadores seleccionados para su estudio en músculo fueron factores de transcripción asociados a la hipoxia, como el factor inducible por hipoxia HIF-1, HIF-2 y el factor nuclear. También biomarcadores inflamatorios como factor de necrosis tumoral-α, interkeukina 6 y 8, factor de crecimiento endotelial vascular y proteína de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1), así como biomarcadores de estrés oxidativo, como superóxidodismutasa (SOD) y actividad catalasa. Además se realizó evaluación de la función muscular en los tres grupos. RESULTADOS: Reclutamos 29 sujetos: 4 con EPOC, 12 con AOS y 13 EPOC-AOS. En el músculo, encontramos diferencias entre los grupos de estudio en VCAM-1 (casos de EPOC que expresan 2,1 veces más que AOS y 1,16 veces más que EPOC-AOS) y SOD (EPOC-AOS que expresan 3,48 veces más que EPOC, y AOS 3,02 veces más que EPOC). CONCLUSIONES: La expresión de biomarcadores estudiados es de intensidad similar en los tres grupos de pacientes referidos, con pocas excepciones.La fuerza muscular periférica y el porcentaje de masa libre de grasa es significativamente menor en los pacientes con EPOC que en los pacientes con AOS. (AU)

OBJECTIVE: Compare the expression of markers of response to hypoxia, inflammation and oxidative stress in biopsy muscle of groups of patients with continuous chronic hypoxia, intermittent chronic and both combined. Evaluate the state of the peripheral musculature and compare it between groups. METHODOLOGY: We included males older than 18 years, diagnosed of COPD, Obstructive Sleep Apnea (OSA) or OSA-COPD, to quadriceps muscle biopsy was performed. biomarkers selected for study in muscle were factors of transcription associated with hypoxia, such as the factor inducible by hypoxia HIF-1, HIF-2 and nuclear factor. Also biomarkers Inflammatory agents such as tumor necrosis factor-α, interkeukin 6, and 8, vascular endothelial growth factor and adhesion protein vascular cell 1 (VCAM-1), as well as stress biomarkers oxidative, such as superoxide dismutase (SOD) and catalase activity. In addition, evaluation of muscle function was performed in the three groups. RESULTS: We recruited 29 subjects: 4 with COPD, 12 with OSA and 13 COPD-OSA. In muscle, we found differences between the study groups in VCAM-1 (COPD cases expressing 2.1-fold more than OSA and 1.16 times more than COPD-OSA) and SOD (COPD-OSA than express 3.48 times more than COPD, and OSA 3.02 times more than COPD). CONCLUSIONS: The expression of studied biomarkers is of similar intensity in the three groups of referred patients, with few exceptions. Peripheral muscle strength and percentage of fat-free mass is significantly lower in patients with COPD than in patients with OSA. (AU)

Estudio proteomico diferencial entre liquidos pleurales secundarios a cáncer de pulmón versus mesotelioma / Differential proteomic study between pleural fluid secondary to lung cancer versus mesothelioma

Objetivo: Encontrar perfiles proteicos en líquido pleural que diferencien derrames pleurales secundarios a cáncer de pulmón (CP) versus mesotelioma pleural maligno (MPM).Metodología: Recogimos líquidos pleurales de 60 pacientes de tres grupos diferentes: MPM (N = 20), CP (N = 20) y derrames pleurales benignos (N = 20). Realizamos un análisis con proteómica diferencial con ITRAQ 4 plex (Applied Biosystem). Realizamos la identificación y cuantificación relativa de las proteínas con el programa Proteome Discoverer 1.4 (Termofisher Scientific). Construimos diagramas de Venn con las proteínas sobre/infra-expresadas en cada grupo. Realizamos una validación interna/externa mediante ELISA (Myobiosorce) añadiendo 25 muestras de CP y 14 de MPM.Resultados: Encontramos sobreexpresión de Pi3K en los derrames pleurales neoplásicos (16,86 +/- 25,83 ng/ml en CP; 20,66 +/- 17,26 ng/ml en MPM vs 5,92 +/- 0,99 ng/ml en controles). Hubo sobreexpresión de SPRM en MPM (30.702 +/- 30.310,53 ng/ml en el grupo MPM vs 10.404 +/- 10.157,72 ng/ml en el grupo CP vs 8.498 + /- 3.437,18 ng/ml en controles). Existió sobreexpresión de RhoB en CP (4,46 +/- 1,65 mg/ml en CP vs 1,65 +/- 2,65 mg/ml en MPM vs 0,92 +/- 1,6 mg/ml en controles). También encontramos sobreexpresión de PDGFR-alfa en derrames pleurales benignos (74,12 +/- 22,57 ng/ml en controles vs 43,05 +/- 23,96 ng/ml en CP vs 36,12 +/- 21,51 ng/ml en MPM).Conclusión: Existe un perfil diferencial proteico entre los derrames secundarios a CP (sobreexpresión de RhoB) y a MPM (sobrexpresión de SPRM). La sobrexpresión de Pi3K indica asociación a derrames pleurales malignos y la de PDGFR-alfa a derrames benignos. (AU)

Objetivo: Find protein profiles in pleural fluid that differentiate pleural effusions secondary to lung cancer (LC) versus malignant pleural mesothelioma (MPM).Metodología: We collected pleural fluids from 60 patients from three different groups: MPM (N = 20), CP (N = 20), and benign pleural effusions (N = 20). We performed differential proteomics analysis with ITRAQ 4 plex (Applied Biosystem). We performed the identification and relative quantification of the proteins with the Proteome Discoverer 1.4 program (Termofisher Scientific). We built Venn diagrams with the over/under-expressed proteins in each group. We performed an internal/external validation using ELISA (Myobiosorce) adding 25 CP and 14 MPM samples.Resultados: We found Pi3K overexpression in neoplastic pleural effusions (16.86 +/- 25.83 ng/ml in PC; 20.66 +/- 17.26 ng/ml in MPM vs 5.92 +/- 0.99 ng/ml in controls). There was overexpression of SPRM in MPM (30,702 +/- 30,310.53 ng/ml in the MPM group vs 10,404 +/- 10,157.72 ng/ml in the CP group vs 8,498 +/- 3,437.18 ng/ml in controls). There was overexpression of RhoB in CP (4.46 +/- 1.65 mg/ml in CP vs 1.65 +/- 2.65 mg/ml in MPM vs 0.92 +/- 1.6 mg/ml in controls). We also found overexpression of PDGFR-alpha in benign pleural effusions (74.12 +/- 22.57 ng/ml in controls vs 43.05 +/- 23.96 ng/ml in PC vs 36.12 +/- 21.51 ng/ml in MPM ).Conclusión: There is a differential protein profile between effusions secondary to CP (RhoB overexpression) and MPM (SPRM overexpression). Pi3K overexpression indicates association with malignant pleural effusions and PDGFR-alpha overexpression with benign effusions. (AU)

Cellular mechanisms involved in the pathogenesis of airway remodeling in chronic lung disease.

Background: Airway epithelial cells and lung fibroblasts play an important role in the development of chronic lung disease, but the exact mechanisms responsible have not been clarified. Our objective was to investigate the involvement of these cells in the inflammatory response associated to chronic lung disease. Methods: Human lung fibroblasts and airway epithelial cells were challenged with Interleukin-1ß and hypoxia, and with inhibitory (simvastatin) stimuli of the inflammatory response. Expression of markers of local inflammation ((IL-8, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), factor-κB1 (NF-κB1)), systemic inflammation ((C-reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA)) and proteases matrix metalloproteinase (MMP) 9 and 12 were assessed by PCR and ELISA. Apoptosis/necrosis was analyzed by flow cytometry. Results: Our results showed that the lung fibroblasts had a higher expression of local and systemic inflammation and protease activity markers when they were treated with IL-1ß compared to airway epithelial cells. Under hypoxic conditions, we observed a decrease in systemic inflammation in lung fibroblasts, which was further attenuated by simvastatin. Conclusion: The lung fibroblasts seem to be the main initially stimulated cells that could potentially trigger the inflammatory response, and be responsible for the eventual onset of chronic lung disease. The involvement of IL-1ß stimulation in systemic inflammatory and proteinase imbalance biomarkers is higher in lung fibroblasts. Apoptosis is not a predominant mechanism in these cells.

Differential biomarker profiles between unprovoked venous thromboembolism and cancer.

BACKGROUND: The relationship between cancer and venous thromboembolic disease (VTD) are complex because the activated coagulation factors are not only involved in thrombosis but also in malignant processes, such as angiogenesis and metastasis. OBJECTIVE: To compare phenotypes of extracellular vesicles (EVs), and levels of D-dimer, soluble P-selectin (sP-selectin) and antigenic tissue factor (TF) between unprovoked VTD patients, who did not develop cancer during one-year follow-up, and those with advanced stage of cancer but not associated with VTD. METHODS: A prospective study in which we included 138 unprovoked VTD patients and 67 advanced cancer patients, who did not develop thrombosis. Levels of EVs of different cellular origin (platelet, endothelium and leukocyte), EVs positive for tissue factor (TF) and P-selectin glycoprotein ligand 1 were quantified by flow cytometry. D-dimer, soluble P-selectin (sP-selectin) and antigenic TF were determined by ELISA. RESULTS: TF-positive EVs, D-dimer, and sP-selectin were markedly elevated in unprovoked VTD patients compared to cancer patients without association with thrombosis. CONCLUSIONS: Levels of TF-positive EVs, D-dimer and sP-selectin are able to discriminate between unprovoked VTD patients not related to cancer and cancer patients not associated with VTD. These results could lead to the application of EVs as biomarkers of both diseases. Key messages: Circulating EVs, specifically TF-positive EVs, in combination with plasmatic markers of hypercoagulable states, such as D-dimer, sP-selectin and antigen TF, are able to discriminate between cancer patients without thrombosis and patients with unprovoked VTD. Research fields could be opened. Future studies will assess if these biomarkers together serve as predicting thrombotic events in cancer populations.

Estudio de los niveles basales de survivina y otros marcadores para la predicción de los resultados de la pleurodesis con talco en derrames pleurales malignos / Study on the baseline levels of survivin and other markers to predict the results of pleurodesis with talc in malignant pleural effusions

La survivina se encuentra sobre-expresada en tumores, y podría ser un buen biomarcador diagnóstico y pronóstico en derrames pleurales malignos. OBJETIVO: estudiar la concentración de survivina en pacientes con derrame pleural maligno sometidos a pleurodesis con talco, relacionarla con el resultado de ésta y comparar sus resultados con otros marcadores como pH, glucosa y LDH en líquido pleural. MÉTODOS: se han incluido 84 pacientes con derrame pleural maligno (32 con cáncer de mama, 25 de pulmón y 27 mesoteliomas) sometidos a toracoscopia y pleurodesis con talco. Se recogieron muestras de líquido pleural antes (basal) y 24 horas después de la pleurodesis, y en ellas se midieron los niveles de survivina, pH, glucosa y LDH. También se estudió la carga tumoral en la pleura y la re-expansión del pulmón tras la toracoscopia y pleurodesis.R RESULTADOS: la presencia de niveles basales de survivina > 30 pg/mL se asoció a alto índice de fracaso de la pleurodesis (p = 0,002), y superó en poder predictivo a pH (p = 0,004), glucosa (p = 0,005) y LDH (p = 0,013) CONCLUSIÓN: la survivina juega un poderoso papel como marcador pronóstico en derrames pleurales malignos, y se suma a otros marcadores clásicos como pH, glucosa y LDH, que están asociados a la agresividad tumoral

Survivin is found to be overexpressed in tumors and could be a good diagnostic and prognostic biomarker in malignant pleural effusions. OBJECTIVE: To study the concentration of survivin in patients with a malignant pleural effusion who undergo pleurodesis with talc, associate it with the result of the procedure and compare the results with other markers like pH, glucose and LDH in pleural liquid. METHODS: 84 patients with malignant pleural effusion (32 with breast cancer, 25 lung cancer and 27 mesotheliomas) who underwent thoracoscopy and pleurodesis with talc were included in the study. Pleural liquid samples were taken before (baseline) and 24 hours after the pleurodesis, measuring the levels of survivin, pH, glucose and LDH. The tumor burden in the pleura and the re-expansion of the lung after thoracoscopy and pleurodesis were also studied. RESULTS: The presence of baseline levels of survivin >30 pg/mL was associated with a high rate of pleurodesis failure (p = 0.002) and surpassed the predictive power of pH (p = 0.004), glucose (p = 0.005) and LDH (p = 0.013). CONCLUSION: Survivin plays a powerful role as a prognostic marker in malignant pleural effusions and joins other classic markers like pH, glucose and LDH, which are associated with tumor aggression

Análisis de degradación de stents metálicos en modelo de cultivo "in vitro" con células epiteliales respiratorias y fibroblastos / Degradation analysis for metal stents in an in vitro cell culture model with respiratory epithelial cells and fibroblasts

Objetivo: investigar la posible degradación de stents metálicos tras co-cultivo con células respiratorias in vitro. Método: durante 21 días se han co-cultivado con la línea CRL-4011 (epitelial) y MRC-5 (fibroblastos) tres tipos de stents: Wallstent(R) (aleación de cobalto-cromo-níquel y molibdeno), Zilver PTX(R) y Zilver Flex(R) (nitinol, aleación de níquel-titanio, con y sin liberación de paclitaxel, respectivamente). Las mismas células sin stent sirvieron como control. Los sobrenadantes de los cultivos se recogieron los días 3, 9, 15 y 21, se alicuotaron y almacenaron a -800 C. Mediante espectrometría de masas (ICP/ MS) se investigaron los niveles de titanio, cromo, níquel, cobalto y molibdeno en los sobrenadantes, y también se han analizado los niveles de esos mismos elementos en el medio de cultivo original (antes de añadirlo a los cultivos celulares). Resultados: en todos los experimentos se encontraron mayores niveles de elementos metálicos en los sobrenadantes recogidos en el tercer día de cultivo, tanto de células epiteliales como de fibroblastos, con diferencias estadísticamente significativas (p<0,002). Los sobrenadantes de los cultivos de células epiteliales con Wallstent mostraron los niveles más altos de níquel y cobalto respecto a los controles (p = 0,001), y los niveles de titanio fueron más altos en los cultivos de Zilver Flex y PTX, constituidos por una aleación de níquel y titanio (p <0,001). Conclusiones: hemos detectado una rápida liberación en el sobrenadante de todos los cultivos de los elementos constitutivos de los tres stents que incluimos en los experimentos, y con niveles muy superiores a los cultivos controles

Objective: To investigate the possible degradation of metal stents after co-culture with respiratory cells in vitro. Methods: Three types of stents were co-cultured with the CRL-4011 line (epithelial) and the MRC-5 line (fibroblasts): Wallstent(R) (cobalt-chromium-nickelmolybdenum alloy), Zilver PTX(R) and Zilver Flex(R) (nitinol, nickel-titanium alloy, with and without paclitaxel release, respectively). The same stentless cells served as the control group. Culture supernatants were collected on days 3, 9, 15 and 21, aliquoted and stored at -80 ºC. The levels of titanium, chromium, nickel, cobalt and molybdenum in the supernatants were studied using inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), and the levels of the same elements were also analyzed in the original culture medium (before adding them to the cell cultures). Results: In all experiments, higher levels of metal elements were found in the supernatants collected on the third day of culture, for both epithelial cells and fibroblasts, with statistically significant differences (p < 0.002). The supernatants of epithelial cell cultures with Wallstent showed the highest levels of nickel and cobalt in comparison to controls (p = 0.001), and titanium levels were higher in Zilver Flex and Zilver PTX cultures, consisting of a nickeltitanium alloy (p < 0.001). Conclusion: We have detected a rapid release in the supernatant of all the cultures of the constituent elements of the three stents that we included in the experiments, and with levels much higher than those of the control cultures

La arteria pulmonar es el principal productor de reactantes de fase aguda en pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva crónica / The pulmonary artery is the main producer of acute phase reactants in patients with chronic obstructive pulmonary disease

INTRODUCCIÓN: El origen de la inflamación sistémica en la EPOC sigue estando poco aclarada. Hemos tratado de comparar la expresión de los niveles de reactantes de fase aguda en pacientes con EPOC y los fumadores sanos (controles), tanto en las arterias pulmonares locales como en leucocitos de sangre periférica y plasma. MÉTODO: Los pacientes se clasificaron como EPOC o fumadores sanos según los resultados de la espirometría. Las arterias pulmonares, leucocitos de sangre periférica y las muestras de plasma se obtuvieron de todos los sujetos incluidos. La expresión génica de la proteína C-reactiva (PCR) y el amiloide sérico A (AAS1, AAS2, y AAS4) se evaluó en muestras de tejidos y leucocitos de sangre periférica mediante RT-PCR. Los niveles de PCR y AAS se midieron mediante ensayos inmunoenzimáticos. RESULTADOS: Se incluyeron un total de 40 pacientes con EPOC y 62 fumadores sanos, reclutados desde comienzos del año 2011 hasta finales del 2012. Tanto PCR y AAS se sobreexpresa en la arteria pulmonar en comparación con los leucocitos de sangre periférica. En los pacientes con EPOC, en la arteria pulmonar, los niveles de expresión génica de la PCR, el AAS1, y el AAS2 fueron 8-, 56-, y 2,3 veces mayor que en los leucocitos de sangre periférica, respectivamente. No se observó correlación entre los niveles plasmáticos de marcadores inflamatorios y su expresión en la arteria pulmonar y leucocitos de sangre periférica. CONCLUSIONES: La sobreexpresión de AAS en las arterias pulmonares en comparación con los leucocitos de sangre periférica sugiere que el pulmón puede ser la principal fuente de AAS en pacientes con EPOC. Otras fuentes potenciales de inflamación sistémica en la EPOC (por ejemplo, el hígado) necesitan un examen más detallado

INTRODUCTION: The origin of systemic inflammation in COPD is still not completely clear. We have attempted to compare the expression levels of acute phase reactants in patients with COPD and healthy smokers (controls), both in the local pulmonary artery and in peripheral blood leukocytes and plasma. METHOD: Patients were classified as having COPD or being healthy smokers according to spirometry results. The pulmonary artery, peripheral blood leukocyte and plasma samples were obtained from all included subjects. Genetic expression of the C-reactive protein (CRP) and serum amyloid A (SAA1, SAA2 and SAA4) was evaluated in tissue samples and peripheral blood leukocytes using RT-CRP. CRP and SAA levels were measured using immunoenzymatic assays. RESULTS: A total of 40 patients with COPD and 62 healthy smokers were included, recruited between early 2011 and late 2012. Both CRP and SAA was overexpressed in the pulmonary artery in comparison with peripheral blood leukocytes. In patients with COPD, genetic expression levels of CRP, SAA1 and SAA2 in the pulmonary artery were 8, 56, and 2.3 times higher than in peripheral blood leukocytes, respectively. No correlation was observed between inflammatory marker plasma levels and their expression in the pulmonary artery and peripheral blood leukocytes. CONCLUSIONS: The overexpression of SAA in pulmonary arteries in comparison with peripheral blood leukocytes suggests that the lung may be the main source of SAA in patients with COPD. Other potential sources of systemic inflammation in COPD (for example, the liver) require more detailed examination

Comparacion de un nuevo agente basado en nanotecnología con el talco convencional para el control de los derrames pleurales malignos / Comparison between a new nanotechnology-based agent and conventional talc in the control of malignant pleural effusions

En este trabajo usamos dióxido de titanio (TiO2), fabricado mediante nanotecnología. Para demostrar su superioridad respecto al talco, realizamos un estudio in vitro comparando la respuesta pro-inflamatoria de ambos agentes sobre células malignas y mesoteliales benignas; investigando la posible inducción de apoptosis y la posible inhibición de angiogénesis también por ambos agentes. Realizamos cultivo de líneas celulares derivadas de mesotelio humano, procedente de mesotelioma bifásico humano y adenocarcinoma bronquial humano. Las células se co-cultivaron con diferentes dosis de talco y de nanopartículas de TiO2. En todas las muestras de sobrenadantes de los cultivos se analizaron los niveles de diferentes mediadores inflamatorios. La tasa de apoptosis se analizó por la expresión de Caspasa-3. Para el estudio de angiostasis se determinaron los niveles de endostatina mediante técnica ELISA. Observamos que la viabilidad de las células mesoteliales benignas es mucho menor al emplear TiO2. En el caso de las células mesoteliales malignas, se observó el mismo efecto con dosis alta de TiO2. En el adenocarcinoma de pulmón, la viabilidad de estas células expuestas al talco fue netamente inferior a la que se observó en la línea celular benigna. La producción de IL-8 fue mucho mayor por parte de las células mesoteliales neoplásicas que por las benignas y aumentó siguiendo un patrón dosis dependiente frente al talco, mientras que cayó con el TiO2. Según estos resultados, se demuestra que el talco es superior al TiO2 en su capacidad de producir mediadores que favorecerían la pleurodesis para el control del derrame pleural maligno

For this study, we used titanium dioxide (TiO2), produced using nanotechnology. To show its superiority with respect to talc, we completed an in vitro study comparing the pro-inflammatory response of both agents towards malignant and benign mesothelial cells; researching the possible apoptosis induction and possible inhibition of angiogenesis for both agents. We took a culture of cell lines derived from human mesothelioma, originating from human biphasic mesothelioma and human bronchial adenocarcinoma. The cells were cocultured with different doses of talc and TiO2 nanoparticles. The levels of different inflammatory mediators were analyzed for each culture supernatant sample. The apoptosis rate was analyzed using caspase-3 expression. The endostatin levels were determined for the angiostasis study using the ELISA technique. We observed that the viability of the benign mesothelial cells is much lower after using TiO2. In the case of malignant mesothelial cells, the same effect was observed with a high dose of TiO2. In adenocarcinoma of the lung, the viability of these cells exposed to talc was distinctly lower than that which was observed in the benign cell line. IL-8 production was much higher in neoplastic mesothelial cells than in benign cells and increased following a dose-dependent pattern with talc, while it decreased with TiO2. According to these results, we can see that talc is superior to TiO2 in its ability to produce mediators which favor pleurodesis for the control of malignant pleural effusions

Origen celular de micropartículas circulantes en pacientes con enfermedad tromboembólica venosa y cáncer / Celular origin of circulating microparticles in patients with venous thromboembolism and cancer

Las micropartículas (MPs) son unas vesículas extracelulares consideradas potentes efectores celulares. Están presentes en individuos sanos y se encuentran elevadas en estados patológicos como enfermedades inflamatorias, neoplásicas y trombosis. La relación entre enfermedad tromboembólica venosa (ETV) y cáncer está bien establecida. Se piensa que las MPs serían una conexión patogénica entre ambas entidades. De confirmarse, podrían utilizarse como biomarcadores. Nuestro objetivo fue caracterizar las MPs en ambas patologías atendiendo a su origen celular (celular, endotelial, plaquetar, leucocitario y las que exhibían en su superficie mucina 1). También se estudiaron parámetros funcionales como el dímero D (DD) y la P-selectina soluble (sPS). Se consideraron 96 pacientes con ETV idiopática y 85 con neoplasias avanzadas de pulmón, gástrico o páncreas. A todos ellos se les realizó un seguimiento clínico de dos años en el que se excluyeron del estudio aquellos que fueron diagnosticados de cáncer en el grupo de ETV o que desarrollaron trombosis en el grupo de pacientes neoplásicos. Finalmente, se analizaron 82 pacientes con ETV y 68 con cáncer. En nuestros resultados encontramos que las MPs totales y las MPs de origen plaquetar diferenciaban ambos grupos de pacientes. Además, se determinaron cifras significativamente mayores de DD y sPS (p <0,001) en el grupo de ETV. Las diferencias encontradas entre ambos grupos, teniendo en cuenta el origen de las MPs, podrían estar causadas por las características protrombóticas del grupo neoplásico y por el secuestro de las mismas dentro de los coágulos activos en el grupo de ETV

Microparticles (MPs) are extracellular vesicles considered to be powerful cellular effectors. They are present in healthy individuals and are elevated in pathological conditions such as inflammatory and neoplastic diseases, and thrombosis. The relationship between venous thromboembolism (VTE) and cancer has been well established. MPs are thought to be a pathogenic connection between the two entities. If confirmed, they could be used as biomarkers. Our aim was to characterize the MPs in both diseases according to their cellular origin (cellular, endothelial, platelet, leukocyte and those that exhibited mucin 1 on their surface). Functional parameters such as D-dimer (DD) and soluble P-selectin (sPsel) were also studied. 96 patients with idiopathic VTE and 85 with advanced lung, stomach or pancreatic neoplasia were considered. All of them were followed clinically for two years and those who were diagnosed with cancer in the VTE group or those who developed thrombosis in the group of neoplastic patients were excluded from the study. Finally, 82 VTE patients and 68 cancer patients were analyzed. In our results, we found that total MPs and platelet-derived MPs differentiated both patient groups. Additionally, significantly greater numbers of DD and sPsel (p <0.001) were determined in the VTE group. The differences found between both groups, taking into account the origin of the MPs, could be caused by the prothrombotic characteristics of the neoplastic group and their sequestration within active clots in the VTE group

Fenotipos inflamatorios, según celularidad del esputo inducido, en asmaticos no tratados con corticoides / Inflammatory phenotypes, based on cellularity of induced sputum in asthmatic patients treated without corticosteroids

OBJETIVOS: nuestro objetivo fue examinar en los 4 fenotipos ya descritos: eosinofílico (Eos), neutrofílico (Neu), mixto y paucigranulocítico (Pau), según muestras de esputo inducido, las diferencias en parámetros de edad, índice de masa corporal (IMC), agudizaciones, test de control del asma (ACT), FEV1 y reversibilidad, así como niveles de óxido nítrico exhalado (FeNO). MÉTODO: estudio descriptivo, de abril de 2011 a septiembre 2014, con inclusión de forma consecutiva de pacientes con asma bronquial sin tratamiento con corticoides inhalados (CI). Se les realiza esputo inducido y se clasificó según celularidad obtenida. Se relacionó cada uno de los cuadro grupos obtenidos con datos clínicos, como nivel del control del asma (Test ACT), número de agudizaciones en el año previo del estudio funcional respiratorio, que incluye datos de espirometría, test de broncodilatación, medición de óxido nítrico exhalado y test de metacolina, según algoritmo GEMA para el diagnostico de asma y test de sensibilidad alérgica (prick test y/o ELISA). RESULTADOS: se obtuvo una muestra adecuada en el 60% de los pacientes, sin efecto adverso alguno. Se incluyeron, finalmente, 55 pacientes asmáticos. Se clasificaron según la celularidad del esputo: 12 pacientes, como Eos, 12 como Neu, 15 como mixto y, finalmente, 16 en el grupo Pau. Encontramos más agudizaciones en el grupo Neu en el año previo. Eos-Neu (p 002); Neu-Mix (p < 0,009); Neu-Pau (p < 0,005); Mix- Pau (p <0,01). Los niveles de FeNO tendieron a ser superiores en los pacientes con eosinofilia, sin significación estadística. CONCLUSIONES: la inducción del esputo es una técnica segura y que permite diferenciar el componente inflamatorio del asma. La presencia de neutrofília se asocia a peor comportamiento clínico

OBJECTIVES: our objective was to examine four, already described phenotypes: eosinophilic (Eos), neutrophilic (Neu), mixed and paucigranulocitic (Pau), based on induced sputum samples, the differences in age parameters, body mass index (BMI), exacerbations, asthma control test (ACT), FEV1 and reversibility, as well as exhaled nitric oxide (FeNO) levels. METHOD: a descriptive study, from April 2011 to September 2014,including consecutive patients with bronchial asthma that was not treated with inhaled corticosteroids(IC). Induced sputumwas taken and classified based on the cellularity obtained. Each of the four groups obtained was related to clinical data, such as asthma control test (ACT Test) level, number of exacerbations in the year prior to the respiratory function study, which included spirometry data, bronchodilation test, measurement of exhaled nitric oxide levels andmethacholine test, following GEMA algorithm to diagnose asthma and allergic sensitivity test (prick test and/or ELISA). RESULTS: an adequate sample was obtained in 60% of the patients, with no adverse effect.Finally, 55 asthmatic patients were included. They were classified according to the cellularity of the sputum: 12 patients, as Eos, 12 as Neu, 15 as mixed and finally, 16 in the Pau group.We encountered that in the previous year, more exacerbations were found in the Neu group: Eos-Neu (p 002); Neu-Mix (p < 0.009); Neu-Pau (p < 0.005); Mix- Pau (p < 0.01). FeNO levels tended to be higher in patients witheosinophilia, but without being statistically significant. CONCLUSIONS: induced sputum is a safe technic to differentiate the inflammatory component of asthma. Thepresenceofneutrophilia is associated with a poorer clinical outcome

Marcadores inflamatorios de disfunción endotelial en la enfermedad tromboembólica venosa / Inflammatory markers of endothelial dysfunction in venous thromboembolic disease

OBJETIVO: investigar si los pacientes con ETV presentan diferencias en la cuantificación de marcadores inflamatorios de disfunción endotelial (IL-6 y IL8) en fase estable. MATERIAL Y MÉTODOS: pacientes con ETV aguda sintomática de cualquier causa en los que, a los 3 meses de seguimiento, se les realizó una determinación de IL-6 e IL-8. Los pacien tes con ETV los dividimos en 3 grupos según la etiología del evento: 1) ETV idiopático. 2) ETV 2º a cáncer. 3) ETV 2º a otra causa. RESULTADOS: la muestra fue de 77 pacientes. La distribución de los pacientes según la etiología de la ETV fue la siguiente: ETV idiopático (n=40). ETV 2º a cáncer (n=26). ETV 2º a otra etiología (n=11). La mediana de IL-6 para cada uno de los grupos fue: ETV idiopática 2,96 pg/ml, ETV secundaria a cáncer 3,87 pg/ml y ETV secundaria a otra etiología 2,30 pg/ml. La mediana de IL-8 para cada uno de los grupos fue de 0,00 pg/ml. Cuando comparamos las dos determinaciones en los 3 grupos según la etiología del evento: 1) ETV idiopático. 2) ETV 2º a cáncer. 3) ETV 2º a otra causa. RESULTADOS: la muestra fue de 77 pacientes. La distribución de los pacientes según la etiología de la ETV fue la siguiente: ETV idiopático (n=40). ETV 2º a cáncer (n=26). ETV 2º a otra etiología (n=11). La mediana de IL-6 para cada uno de los grupos fue: ETV idiopática 2,96 pg/ml, ETV secundaria a cáncer 3,87 pg/ml y ETV secundaria a otra etiología 2,30 pg/ml. La mediana de IL-8 para cada uno de los grupos fue de 0,00 pg/ml. Cuando comparamos las dos determinaciones en los 3 grupos obser-vamos como no hay diferencias significativas entre ellos, aun-que existía cierta tendencia a la significación estadística en la determinación de IL-6 (p = 0,054). CONCLUSIONES: los marcadores inflamatorios de disfunción endotelial (IL-6 y IL8) no mostraron diferencias significativas en los tres grupos, aunque un incremento de la muestra podría evidenciar diferencias de la IL-6 entre los tres grupos. A los tres meses de tratamiento los niveles medios de IL-8 son inde-tectables en los 3 grupos

OBJECTIVE: to investigate whether patients with VTD present differences in the quantification of endothelial dys-function inflammatory markers (IL-6 and IL8) during the stable phase. MATERIAL AND METHODS: patients with symptomatic acute VTD of any cause and who, at the 3 months follow-up, had determina-tion for IL-6 and IL-8 performed. The patients with VTD were divided into three groups according to the etiology of the event: 1) idiopathic VTD, 2) VTD secondary to cancer, 3) VTD secondary to another cause. RESULTS: there were 77 patients in the sample. The distribution of the patients according to the etiology of the VTD was as fo-llowing: idiopathic VTD (n=40). VTD secondary to cancer (n=26). VTD secondary to another cause (n=11). The median of IL-6 for each one of the groups was: idiopathic VTD 2.96 pg/ml. VTD secondary to cancer 3.87 pg/ml. VTD secondary to another cause 2.30 pg/ml. The median of IL-8 for each one of the groups at three months was 0.00 pg/ml. When we compared the two determinations in the three groups, we observed that there were no significant differences between them, although there was a certain tenden-cy towards statistical significance in the determination of IL-6 (p = 0.054). CONCLUSIONS: the endothelial dysfunction inflammatory markers (IL-6 and IL8) did not show significant differences in the three groups, although an increase in the size of the sample could lead to differences being found in the IL-6 between the three groups. After three months of treatment, the median levels of IL-8 are indetectables in the three groups

Estudio de la asociación de los polimorfismos de laglutation -S-transferasa y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica en la raza caucásica / Study of the association of polymorphisms of glutathione-s-transferase and chronic obstructive pulmonary disease in caucasians

Introducción: Diversos estudios previos han encontrado una asociación no consistente entre los polimorfismos de la Glutation-S-transferasa (GST) y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), con una asociación diferente según el área geográfica estudiada a nivel mundial. El objetivo del presente trabajo fue estudiar esa relación en una muestra caucásica española. Método: Estudio observacional analítico de casos-control en el que se incluyeron pacientes con EPOC y sujetos fumadores sin la enfermedad. A cada sujeto incluido se le recogieron sus datos sociodemográficos y clínicos mediantes un cuestionario estandarizado y se les extrajo una muestra de sangre para el estudio de los polimorfismos GSTP1 Ile105Val (A131G) Exon5, GSTP1 Ala114Val exón 6, GSTM1 de elección y GGSTT1delección.Resultados: La muestra estaba compuesta por 143 casos (64años, FEV1 69%) y 55 controles. El polimorfismo más asociado fue el GSTT que en el análisis bivariante se acercó a la significación estadística, alcanzándola en el análisis de regresión ajustado por sexo, paquetes-año e IMC (p = 0,031). El análisis (..) (AU)

Introduction: Various previous studies have found a non consistent association between polymorphisms of Glutathione-S-transferase (GST) and chronic obstructive pulmonary disease (COPD), with a different association according to the geographic area studied at global level. The objective of the present work was to study that relationship in a Spanish Caucasian sample. Method: Analytical observational case-control study including patients with COPD and smokers without the disease. Socio-demographic and clinical data were recorded by means of a standardized questionnaire, and a blood sample extracted from each participant for the study of the polymorphisms (..) (AU)

Evaluation of liposome populations using a sucrose density gradient centrifugation approach coupled to a continuous flow system.

A method for the evaluation of liposome size populations using sucrose density gradient centrifugation coupled with a continuous flow system is presented. Liposomes, prepared using different methods (rapid solvent evaporation, rehydration, and detergent removal) and modified by assaying several procedures (shaking, sonication and extrusion) were evaluated according to the type of liposome, size and polydispersity. The preparation of liposomes was carried out in the presence of the fluorophor cresyl violet. Extracts of the liposomes were homogenised and centrifuged at 20,073 x g at 4 degrees C for 30 min using sucrose density gradient centrifugation programmes, which provide efficient liposome separation in different sizes. The results of the separation procedure were tested by aspiration of the extracts into a continuous flow system in which the liposomes were disrupted by the continuous mixing with a Triton X-100 solution, prior to their translation to the detector. The luminescence provided by the liberation of the encapsulated fluorophor indicates the distribution of liposomes in each density gradient stage. Three zones were obtained: zone alpha, containing giant unilamellar and multivesicular vesicles, zone beta, with large and medium size liposomes, and zone gamma, which contained small size liposomes. The precision of the separation zones obtained, expressed as RSD%, was lower than 5.6% in all instances. The method provides a relative rapid way to evaluate the liposome polydispersity and size after using conventional methods of synthesis and mechanical modifications.